Прин­цип действия на­бо­ра ре­а­ген­тов ALSENSE для выяв­ле­ния Phytoplasma sp. ме­то­дом ПЦР-РВ за­клю­ча­ет­ся в про­ве­де­нии по­ли­ме­раз­ной цеп­ной ре­ак­ции в ре­жи­ме ре­аль­но­го вре­ме­ни (ПЦР-РВ). В ос­но­ве ме­то­да ПЦР ле­жит мно­го­крат­ное удво­е­ние опре­делён­но­го участ­ка ДНК при по­мо­щи ДНК-по­ли­ме­ра­зы в ис­кус­ствен­ных усло­ви­ях (in vitro). В ре­зульта­те на­ра­ба­ты­ва­ют­ся ко­пии ДНК в до­ста­точ­ном для до­сто­вер­но­го опре­де­ле­ния ре­зульта­та ко­ли­че­стве. В хо­де ре­ак­ции ко­пи­ру­ет­ся только за­дан­ный уча­сток ДНК, удо­вле­тво­ря­ю­щий усло­ви­ям спе­ци­фич­но­сти, за­ло­жен­ным в струк­ту­ре прай­ме­ров, и только в том слу­чае, ес­ли он при­сут­ству­ет в ис­сле­ду­е­мом об­раз­це.

Прай­ме­ры бы­ли скон­стру­и­ро­ва­ны на ос­но­ве по­сле­до­ва­тель­но­сти кон­сер­ва­тив­но­го участ­ка ге­на 16S ри­бо­сом­ной РНК не­скольких ви­дов фи­то­плазм, сре­ди ко­то­рых наи­бо­лее ак­ту­аль­ны­ми яв­ля­ют­ся Can­di­da­tus Phy­to­plas­ma mali, Can­dida­tus Phy­to­plas­ma pyri, Can­di­da­tus Phy­to­plas­ma pru­no­rum, Can­di­da­tus Phy­to­plas­ma me­liae и Can­di­da­tus Phy­to­plas­ma his­pa­ni­cum, де­тек­ция ам­пли­фи­ци­ро­ван­ной ДНК обес­пе­чи­ва­ет­ся ин­тер­ка­ли­ру­ю­щим флу­о­рес­цент­ным кра­си­те­лем SybrGreen®.

Ана­ли­ти­че­ская спе­ци­фич­ность: 100%

Ана­ли­ти­че­ская чув­стви­тель­ность: для ис­пыта­ния ана­ли­ти­че­ской чув­стви­тель­но­сти на­бо­ра был про­из­ве­ден ряд из 8-ми де­ся­ти­крат­ных раз­ве­де­ний ДНК Phy­to­plas­ma ma­li, по­лу­чен­ной из за­ра­жен­но­го рас­те­ния. По­ло­жи­тель­ная ре­ак­ция на­блю­да­лась при раз­ве­де­нии ис­ход­но­го об­раз­ца в 10⁷ раз.