Прин­цип ме­то­да за­клю­ча­ет­ся в по­сле­до­ва­тель­ном про­ве­де­нии ре­ак­ции об­рат­ной тран­скрип­ции и по­ли­ме­раз­ной цеп­ной ре­ак­ции в од­ной про­бир­ке. Ре­ак­ция об­рат­ной тран­скрип­ции про­во­дит­ся с це­лью об­ра­зо­ва­ния ком­пле­мен­тар­ной ДНК (кДНК) на мат­ри­це це­ле­вой РНК. На эта­пе ПЦР об­ра­зо­вав­ша­я­ся кДНК мно­го­крат­но ам­пли­фи­ци­ру­ет­ся. Де­тек­ция про­дук­тов ам­пли­фи­ка­ции осу­ществ­ля­ет­ся во вре­мя ана­ли­за. Для это­го в со­став ре­ак­ци­он­ной сме­си, на­ря­ду с прай­ме­ра­ми и дру­ги­ми ком­по­нен­та­ми ре­ак­ции, до­бав­ле­ны спе­ци­аль­ные флу­о­рес­цент­ные мет­ки (зон­ды). Каж­дый ДНК-зонд не­сет флу­о­рес­цент­ную мет­ку и га­си­тель флу­о­рес­цен­ции. При об­ра­зо­ва­нии спе­ци­фич­но­го про­дук­та ДНК-зонд раз­ру­ша­ет­ся, действие га­си­те­ля на флу­о­рес­цент­ную мет­ку пре­кра­ща­ет­ся, что ведёт к воз­рас­та­нию уров­ня флу­о­рес­цен­ции.

В со­став ре­ак­ци­он­ной сме­си вхо­дят оли­го­нук­лео­ти­ды и зон­ды для од­но­вре­мен­ной ам­пли­фи­ка­ции и де­тек­ции участ­ков РНК ге­но­мов ви­ру­сов и ге­на РН­Ка­зы P ге­ном­ной ДНК че­ло­ве­ка (эн­до­ген­ный внут­рен­ний кон­троль). Ис­поль­зо­ва­ние эн­до­ген­но­го ВКО поз­во­ля­ет:

• оце­нить пра­виль­ность взя­тия био­ма­те­ри­а­ла, его транс­пор­ти­ров­ки и хра­не­ния;
• кон­тро­ли­ро­вать эф­фек­тив­ность вы­де­ле­ния нук­ле­и­но­вых кис­лот и эта­пов ПЦР-ис­сле­до­ва­ния, от­сут­ствие ин­ги­би­ро­ва­ния ре­ак­ции.

Ре­зульта­ты ам­пли­фи­ка­ции ре­ги­стри­ру­ют­ся по сле­ду­ю­щим ка­на­лам флу­о­рес­цент­ной де­тек­ции (таб­ли­ца 1):

Таб­ли­ца 1 – Ка­на­лы де­тек­ции про­дук­тов ам­пли­фи­ка­ции:

На­бор ре­а­ген­тов «ALSENSE FLU-SARS» (AL-SARSFLU-96, на 96 об­раз­цов):

• Бу­фер ре­ак­ци­он­ный – 1,4 мл × 1 про­бир­ка;
• Фер­мент­ная смесь – 100 мкл × 1 про­бир­ка;
• ПКО – 100 мкл × 1 про­бир­ка;
• ОКО – 500 мкл × 1 про­бир­ка.