Описание
НАЗНАЧЕНИЕ
Проведение скрининга новорожденных на наличие отклонений в профилях концентраций аминокислот, ацилкарнитинов, нуклеозидов, сукцинилацетона и лизофосфатидилхолинов позволяет выявлять заболевания, связанные с нарушением обмена веществ на раннем (доклиническом) этапе. Своевременная постановка диагноза и назначение лечения способствует благоприятному прогнозу заболевания и значительно снижает риски ранней смерти и инвалидизации детей.
С помощью набора реагентов «АЛМАСС Нео» одновременно можно определить концентрацию 57 различных аналитов ‒ 14 аминокислот, 36 карнитинов, 2 нуклеозида, сукцинилацетон и 4 лизофосфатидилхолина в образце периферической крови младенцев на стандартных бумажных тест-бланках методом тандемной масс-спектрометрии без дериватизации. Отклонение от нормы концентрации каждой определенной аминокислоты или ацилкарнитина может свидетельствовать о наличии какой-либо из форм метаболических нарушений (аминоацидопатий, органических ацидурий, дефектов окисления жирных кислот и др.), что позволяет выявить у новорожденных нарушение обмена веществ на раннем (доклиническом) этапе и назначить дополнительные исследования для постановки и уточнения диагноза. В состав компонентов набора входят 30 контрольных аналитов и 29 изотопно-меченых стандартов.
Наборы реагентов представлены в широких вариантах комплектаций:
- Форма выпуска «АЛМАСС Нео Старт» на 480 и 960 определений – базовая комплектация, которая включает внутренний стандарт, контроли низкого и высокого уровня, микропланшеты и полимерные пленки для заклеивания микропланшетов.
- Форма выпуска «АЛМАСС Нео Старт Р» на 480 и 960 определений дополнительно включает элюент и экстракционный раствор.
- Форма выпуска «АЛМАСС Нео Старт СА» на 480 и 960 определений включает реагент для определения сукцинилацетона.
- Форма выпуска «АЛМАСС Нео Макс» на 480 и 960 определений – максимально полная комплектация, которая включает внутренний стандарт, контроли низкого и высокого уровня, микропланшеты, полимерные пленки для заклеивания микропланшетов, элюент, экстракционный раствор и реагент для определения сукцинилацетона.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Материалом для исследования служат сухие пятна крови (или DBS, от англ. Dried Blood Spot), получаемые в роддоме путем отбора нескольких капель крови у новорожденного и их высушивания на специальной карточке. Определение концентраций аминокислот, свободного карнитина, ацилкарнитинов, аденозина с использованием набора реагентов «АЛМАСС Нео» включает следующие этапы:
- экстракцию аналитов из высушенных пятен крови раствором, содержащим меченые стабильными изотопами внутренние стандарты;
- анализ с использованием системы тандемной масс-спектрометрии (МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (MRM);
- количественную оценку результата по отношению к отклику соответствующего внутреннего стандарта известной концентрации.
На этапе пробоподготовки сухие пятна крови инкубируют с экстракционным раствором, который содержит меченые стабильными изотопами внутренние стандарты и реагент для определения сукцинилацетона (гидразин дигидрохлорид). В крови сукцинилацетон находится в связанном с белками плазмы виде, Гидразин дигидрохлорид обеспечивает экстрагирование сукцинилацетона из белковых комплексов за счет дериватизации его до 3-(5-метил-1H-пиразол-3-ил) пропановой кислоты.
Подготовленные пробы анализируют с использованием системы тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) в режиме мониторинга множественных реакций (MRM). Полученный отклик аналита сравнивают с откликом соответствующего внутреннего стандарта и на основе известной концентрации внутреннего стандарта определяют содержание аналита. Результат, получаемый по каждому аналиту, пропорционален концентрации аналита в исследуемом образце.
ПАНЕЛЬ АНАЛИТОВ
| Аналит | Внутренний стандарт | Контроль |
| Аминокислоты | ||
| Ala | 2H3-Ala | Ala |
| Arg | 13C6-Arg | Arg |
| Asa | 13C6-Arg | Asa |
| Cit | 2H2-Cit | Cit |
| Gln/Lys | 13C5-Gln | Gln |
| Glu | 13C5-Gln | Gln |
| Gly | 13C2,15N -Gly | Gly |
| Leu/Ile/Pro-OH | 2H3-Leu | Leu |
| Met | 2H3-Met | Met |
| Orn | 2H2-Orn | Orn |
| Phe | 13C6-Phe | Phe |
| Pro | 13C5-Pro | Pro |
| Tyr | 13C6-Tyr | Tyr |
| Val | 13C5-Val | Val |
| Ацилкарнитины | ||
| C0 | 2H3-C0 | C0 |
| C2 | 2H3-C2 | C2 |
| C3 | 2H3-C3 | C3 |
| C3DC/C4OH | 2H3-C4 | C4 |
| C4 | 2H3-C4 | C4 |
| C4DC/C5OH | 2H3-C5 | C5 |
| C5 | 2H3-C5 | C5 |
| C5:1 | 2H3-C5 | C5 |
| С5DC/C6OH | 2H3,13C-C5DC | С5DC |
| C6 | 2H3-C6 | C6 |
| C6DC | 2H3,13C-C5DC | С5DC |
| C8 | 2H3-C8 | C8 |
| C8:1 | 2H3-C8 | C8 |
| C10 | 2H3-C10 | C10 |
| C10:1 | 2H3-C10 | C10 |
| C10:2 | 2H3-C10 | C10 |
| C12 | 2H3-C12 | C12 |
| C12:1 | 2H3-C12 | C12 |
| C14 | 2H3-C14 | C14 |
| C14:1 | 2H3-C14 | C14 |
| C14:2 | 2H3-C14 | C14 |
| C14OH | 2H3-C14 | C14 |
| C16 | 2H3-C16 | C16 |
| C16:1 | 2H3-C16 | C16 |
| C16OH | 2H3-C16 | C16 |
| C16:1OH/C17 | 2H3-C16 | C16 |
| C18 | 2H3-C18 | C18 |
| C18:1 | 2H3-C18 | C18 |
| C18:2 | 2H3-C18 | C18 |
| C18OH | 2H3-C18 | C18 |
| C18:1OH | 2H3-C18 | C18 |
| C18:2OH | 2H3-C18 | C18 |
| C20 | 2H9-C26 | C26 |
| C22 | 2H9-C26 | C26 |
| C24 | 2H9-C26 | C26 |
| C26 | 2H9-C26 | C26 |
| Кетоны | ||
| SA | 13С5-SA | SA |
| Нуклеозиды | ||
| ADO | 13C5-ADO | ADO |
| D-ADO | 13C5-ADO | ADO |
| Лизофосфолипиды | ||
| C20:0-LPC | 2H4-C26:0-LPC | C26:0-LPC |
| C22:0-LPC | 2H4-C26:0-LPC | C26:0-LPC |
| C24:0-LPC | 2H4-C26:0-LPC | C26:0-LPC |
| C26:0-LPC | 2H4-C26:0-LPC | C26:0-LPC |
ПРЕИМУЩЕСТВА
- одновременное определение 57 различных аналитов: 14 аминокислот, 36 карнитинов, 2 нуклеозида, сукцинилацетона и 4 лизофосфатидилхолина в одном образце;
- возможность проводить скрининг более чем 30 форм врожденных и (или) наследственных заболеваний новорожденных;
- пригодность для массовых исследований: время анализа одного образца сокращается из-за отсутствия необходимости проводить дериватизацию исследуемых веществ и использования метода Flow Injection (без колонки);
- широкая вариативность комплектаций.
