Описание
НАЗНАЧЕНИЕ
Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии является одним из важнейших этапов в оценке иммунного статуса человека. Лимфоциты экспрессируют набор поверхностных (маркеры дифференциации, или CD-антигены) антигенов, уникальных для каждой субпопуляции. На основании сведений о наличии на поверхности лимфоцитов соответствующих CD-антигенов и их комбинаций исследуемые клетки крови можно отнести к определенной популяции лимфоцитов.
Реагент «АЛФЛОУ МультиКлон Т» представляет собой готовую смесь моноклональных антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Реагент позволяет одновременно идентифицировать субпопуляции лимфоцитов, экспрессирующих CD3, CD8, CD45, CD4 антигены, определять их процентное содержание и рассчитывать абсолютное число клеток в образце *.
* Двухплатформенным методом или одноплатформенным методом с использованием микросфер.
| Определяемые параметры | |
| CD45 | общелейкоцитарный антиген |
| CD3 | маркер Т-клеток для идентификации Т-лимфоцитов и их субпопуляций |
| CD4 | в сочетании с CD3 служит для определения популяции Т-хелперов |
| CD8 |
в сочетании с CD3 служит для определения популяции цитотоксических Т-лимфоцитов |
| CD3+CD4+/CD3+CD8+ | соотношение хелперных и цитотоксических Т-лимфоцитов |
| CD3+CD4+CD8+ | дубль-позитивные Т-лимфоциты |
| CD3+CD4-CD8 | дубль-негативные Т-лимфоциты |
ПРИНЦИП РАБОТЫ
Принцип метода основан на способности моноклональных антител специфично связываться с поверхностными антигенами лейкоцитов. Реакция специфического взаимодействия антиген-антитело обеспечивается путем инкубации образца цельной крови с реагентом моноклональных антител. Эритроциты, содержащиеся в образце цельной крови, подлежат разрушению с помощью лизирующего реагента. Идентификация взаимодействия антиген-антитело осуществляется при анализе флуоресцентного сигнала от флуорохромов, входящих в состав реагентов, на проточном цитометре. При выполнении исследования на проточном цитометре суспензия предварительно окрашенных клеток проходит через проточную кювету, где каждая клетка по очереди пересекает луч лазера. Световые сигналы, получаемые при взаимодействии луча лазера с клетками и флуорохромами на поверхности клеток, регистрируются системой детекции проточного цитометра, преобразуются в электрические импульсы и обрабатываются с помощью программного обеспечения прибора.
ХАРАКТЕРИСТИКИ
| Моноклональное антитело | Специфичность | Флуорохром | Возбуждение (лазер) |
| CD45 | Поверхностный антиген CD45 человека | PerCP-Cy5.5 | 488 нм (синий) |
| CD3 | Поверхностный антиген CD3 человека | AF488 | 488 нм (синий) |
| CD8 | Поверхностный антиген CD8 человека | PE | 488 нм (синий) |
| CD4 | Поверхностный антиген CD4 человека | AF647 | 633-640 нм (красный) |